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miércoles, 24 de agosto de 2022

Toma de Muestra Sanguínea

El Sistema de recolección de sangre BD Vacutainer ® es una alternativa segura para la recolección de muestras de sangre venosa con la mejor calidad. Una venopunción exitosa y la obtención de una muestra de calidad, empiezan con la apropiada elección del sitio y los dispositivos adecuados para llevar a cabo el procedimiento.

Recuerde, los mejores sitios de venopunción son:

Antes de iniciar el procedimiento de toma de muestra es importante asegurarse de seguir las recomendaciones para reducir las probables fuentes de error (edad del paciente, condiciones del paciente o accesibilidad del sitio de punción; como por ejemplo, pacientes oncológicos, geriátricos, obesos, infantes, etc.), tomando en cuenta las últimas actualizaciones de CLSI.

A continuación compartimos con usted el orden recomendado por CLSI para realizar las tomas de muestra con aguja de toma múltiple o equipo alado.


Al utilizar equipo alado y si el tubo azul fuera el primero o único a utilizar, es importante recordar que debe utilizarse antes un tubo de descarte, por el aire almacenado en el tubo flexible, ya que puede alterar las proporciones de anticoagulante-muestra. El tubo de descarte puede ser cualquiera que no tenga aditivos.






Ventajas Clínicas: EDTA K2 es el anticoagulante por excelencia para recolección de especímenes y cuenta de células de sangre según la CLSI y El Consejo Internacional para la estandarización de la Hematología. Fue escogido por las siguientes razones: 

EDTA K3 provoca mayor contracción de glóbulos rojos, produce un mayor aumento en el volumen de células a medir, es un aditivo líquido y provoca la dilución de la muestra. El resultado de comparación directa de mediciones puede ser de 1-2% más bajo que con EDTA K2. 

EDTA K2 es aplicado por aspersión en el interior del tubo y al igual que EDTA K3 requiere de 8-10 inversiones para una adecuada mezcla del anticoagulante con la mezcla.











La punción arterial es la técnica de recolección para obtener una muestra para el análisis de gases sanguíneos, que permite tener un panorama de cómo es que los diferentes órganos y tejidos están recibiendo el oxígeno. Ideal en pacientes en condiciones críticas, ya que su composición se considera homogénea en cualquier parte del cuerpo (no así la sangre venosa).

La selección del sitio de punción para la obtención de gases arteriales con jeringa de gasometría puede ser: radial, braquial o femoral.



Referencias:

http://promac.mx/wp-content/uploads/2015/12/BD-Vacutainer-1.pdf


sábado, 12 de mayo de 2018

Hemostasia


La hemostasia es un mecanismo de defensa del organismo que se activa tras haber sufrido un traumatismo o lesión que previene la pérdida de sangre del interior de los vasos sanguíneos. Su función es mantener la integridad y permeabilidad del sistema circulatorio, previniendo la pérdida de sangre de los vasos intactos y deteniendo la hemorragia de los vasos lesionados.

Mecanismos de la hemostasia:
    Vaso lesionado
    Vasoconstrición
    Formación de un trombo plaquetario inestable, adhesión de plaquetas, agregación plaquetas
    Estabilización del tapón plaquetario con fibrina, coagulación
    Fibrinólisis


La hemostasia deriva de la adecuada interacción de tres sistemas: la hemostasia primaria, hemostasia secundaria y sistema fibrinolítico.

1. HEMOSTASIA PRIMARIA:
Formación del tapón hemostático primario. Depende de la integridad vascular (endotelio y
subendotelio) y funcionalidad plaquetaria (alteraciones cuantitativas o cualitativas).
Cuando se produce una lesión en un vaso el primer mecanismo para detener la hemorragia es una vasoconstricción local refleja y a continuación la formación del tapón hemostático plaquetario.

      I.        Adhesión plaquetaria: Las plaquetas se adhieren a las fibrillas de colágeno del subendotelio vascular mediante receptores de membrana: Gp Ia y Gp IIa (en endotelio) y GpIb/IX (en la membrana plaquetar) formando un puente con el factor von Willebrand (vWF).

    II.        Activación: La activación plaquetaria depende de la síntesis de Tromboxano A2 y PGI2 por la vía de la ciclooxigenasa (FIGURA 1).

   III.        Secreción: En los gránulos densos δ y gránulos α de las plaquetas existen sustancias que regulan la agregación y la activación de la coagulación: ADP, calcio, serotonina, PDGF (Factor de crecimiento obtenido de plaquetas), Factor 4 plaquetario.

  IV.      Agregación: Formación del tapón plaquetario. Depende fundamentalmente del vWF y de otros factores estimulantes.


HEMOSTASIA SECUNDARIA.
Casi simultáneamente a la formación del tapón hemostático primario, se pone en marcha el proceso de coagulación dependiente de las proteína plasmáticas, y que consiste en la formación de fibrina soluble a partir de fibrinógeno plasmático.
Clásicamente este conjunto de reacciones y activaciones de proteínas se ha interpretado como una cascada en donde se distinguían dos vías: en vía extrínseca e intrínseca. Actualmente se considera que ambas vías no son independientes en absoluto, ya que la vía extrínseca activa también al fX a través del fXI, considerándola como el inicio fisiológico de la coagulación.

Sin embargo efectos didácticos y de pruebas diagnósticas, seguimos utilizando esta nomenclatura.
  1.       .        VIA EXTRINSECA o DEL FACTOR TISULAR:  Es una vía dependiente del Factor tisular (Tromboplastina) que forma un complejo con el Factor VII y el Calcio, convirtiendo al fVII en una proteasa activa que actúa sobre el factor X activándolo.

La llamada “hipótesis alterna o revisada del factor tisular”: el factor tisular es el mejor indicador de la puesta en marcha del proceso coagulativo, al formar un complejo con el FVII, activándolo (FVIIa). Al mismo tiempo el factor tisular hace de cofactor del FVIIa para que actúe sobre IX y X.
    II.        VIA INTRÍNSECA o SISTEMA DE CONTACTO: El plasma contiene todos los elementos necesarios para la coagulación. En este caso la porción lipídica es el FP3. Los factores de contacto: fXII, Precalicreína, y cininógeno de alto peso molecular, se activan por el contacto con la piel, complejos Antígeno/anticuerpo, colágeno...
El factor XIIa activa al XI y el XIa al IX, que forma complejo con el factor VIII, el FP3, y el Calcio (complejo protrombina) activando finalmente el factor X. El factor XI también es activado por el factor VII (“hipótesis alterna del factor tisular”)
   III.        VIA COMÚN: El Factor Xa forma un complejo con el factor V y el Calcio que convierte la Protrombina en Trombina.
  IV.        FIBRINOGÉNESIS: El papel fundamental de la Trombina es activar al factor XIII para actuar frente al Fibrinógeno convirtiéndolo en polímeros estables de Fibrina.
   V.        FIBRINÓLISIS: La lisis del coágulo comienza inmediatamente después de la formación del coágulo. Sus activadores son tanto por parte de la vía extrínseca (factor tisular), como por la vía intrínseca, factor XII, así como otros exógenos: Urokinasa, tPA (activador tisular del plasminógeno). Los inhibidores del proceso de fibrinólisis ayudan a mantener el equilibrio hemostático y evitar los fenómenos trombóticos: Antitrombina, Proteína C, Proteína S.






ANTICOAGULANTES
Un anticoagulante es una sustancia endógena o exógena que interfiere o inhibe la coagulación de la sangre, creando un estado antitrombótico o prohemorrágico. Se distinguen sustancias endógenas, producidas por el propio organismo y sustancias exógenas (fármacos).
Poseen un efecto biológico, lo cual permite que se puedan dividir en dos tipos:

1. Anticoagulantes de acción indirecta: Este tipo de anticoagulantes son aquellos que por medio de su intervención con otras proteínas alteran el funcionamiento de las cascadas de coagulación, esta acción también sucede cuando actúan en otras vías metabólicas.

Entre los anticoagulantes de acción indirecta se encuentran:
  • ü  Inhibidores medianos de antitrombina III
  • ü  Inhibidores de síntesis de factores de coagulación
  • ü  Derivados del dicumarol
  • ü  Heparina no fraccionada
  • ü  Heparina de bajo peso molecular
  • ü  Danaparoide sódico


2. Anticoagulantes de acción directa: Estos anticoagulantes son aquellos que son capaces de inhibir la cascada de la coagulación.

Entre los anticoagulantes de acción directa, se encuentran:
Inhibidores directos de trombina
Hirudina
Argatroban


Mecanismos anticoagulantes naturales: 
1. Factores de superficie endotelial:
El organismo tiene la capacidad de evitar la coagulación de la sangre mediante:
      Endotelio vascular que evita el contacto de la colágena con las plaquetas.

   Una capa de Glicocalix adsorbido en la superficie interna del endotelio que repele a los factores de coagulación.
    La proteína Trombomodulina que al unirse con la trombina reduce el proceso de coagulación y que además activa a la PCA (Proteína C Activada) que a su vez inactiva al factor V y al factor VIII de la coagulación.

No debemos confundir a esta proteína C activada que tiene un efecto anticoagulante con la proteína C reactiva que es un marcador inflamatorio que se produce en el caso de invasión por un microorganismo extraño y que tiene la función de unirse con la proteína C de la membrana de la bacteria para promover su fagocitosis por los macrófagos.

2. Antitrombina III:
Existe en la circulación una alfa globulina llamada Antitrombina III que se combina con la trombina para inhibir su acción sobre el fibrinógeno y por tanto tiene un efecto anticoagulante.

3. Heparina
Es un potente Anticoagulante Natural, pero que también ha sido sintetizado actualmente. Su concentración es relativamente baja en la sangre por lo que sus efectos anticoagulantes son muy limitados. La fuente de heparina natural son los basófilos y los mastocitos y por si sola tiene poca o ninguna propiedad anticoagulante, pero cuando se combina con la antitrombina III aumenta su efecto inhibidor sobre la trombina en varios cientos de veces, la heparina tiene carga muy negativa de modo que se desarrolló un antídoto para contrarrestar su efecto anticoagulante en caso de sobredosis.
Esta sustancia se llama Sulfato de Protamina, de carga positiva y al ser inyectado por vía intravenosa contrarresta el efecto de la heparina en pocos minutos.

4. Plasminogeno y Plasmina
En la sangre circundante existe una globulina llamada Plasminógeno o Profibrinolisina que cuando se activa se convierte en una sustancia llamada Plasmina o Fibrinolisina que digiere los hilos de fibrina, al factor V al factor VIII y tiene por tanto, no solo acción fibrinolitica, sino también anticoagulante.

5. Activador tisular de Plasminógeno
El Plasminógeno se origina por acción de un activador tisular de Plasminógeno    (t – PA). Si este activador no se pone de manifiesto, la actividad anticoagulante del Plasminógeno para convertirse en Plasmina es muy escasa, actualmente el tratamiento para disolver trombos intra vasculares arteriales y venosos se basa en la administración de estreptoquinasa dentro de las primeras 6 horas de haberse formado el trombo, especialmente cuando se trata de trombos en las arterias coronarias pudiendo recanalizar estos vasos y evitando el infarto de miocardio.

6. Anticoagulantes no naturales.
Existen sustancias que no están presentes en el organismo pero que tienen acción anticoagulante cuando se las administra. La Warfarina sódica y otras similares actúan como anticoagulantes por ser antagonistas competitivos de la vitamina K.

La vitamina K se absorbe en la mucosa intestinal y se almacena en el hígado donde se utiliza para la síntesis de varios factores de la coagulación (II-VII-IX-X). Si estos factores no se sintetizan, no se podrá realizar la coagulación ni por la vía intrínseca ni por la vía extrínseca. La Warfarina y sus derivados se utilizan para evitar tanto las trombosis arteriales como venosos pero más efectiva es para evitar los trombos rojos o venosos.

La Warfarina tiene algo en su contra, si queremos revertir el efecto anticoagulante no disponemos de un antídoto directo e inmediato, como en el caso de la heparina que tiene como antídoto al sulfato de protamina.

En este caso, para revertir el efecto de la Warfarina solamente tenemos como alternativa administrar vitamina K por vía intravenosa y esperar un tiempo de varias horas para que el hígado, si es que no está en insuficiencia, nuevamente sintetice los factores de la coagulación vitamina K dependientes.

Actualmente se usan como anticoagulante las heparinas de bajo peso molecular, que son heparinas fraccionadas que tienen menos efectos secundarios que la heparina no fraccionada pero que tienen una potencia anticoagulante menor que la heparina.

Se consideran como anticoagulantes:
  1. Mezcla de oxalatos.
  2. Citrato de sodio.
  3. Oxalato de sodio.
  4. EDTA.
  5. Heparina.
  6. ACD.
  7. CPD.


Mezcla de Oxalatos. También llamada anticoagulante de Wintrobe. Contiene oxalato de amonio, oxalato de potasio, formol y agua.
Para 5ml de sangre se utilizan 0.5ml de la mezcla de anticoagulante (desecado en estufa a 37ºC o a temperatura ambiente antes de utilizarlo); esta solución anticoagulante actúa como tal para fijación de calcio y debe usarse siempre desecado para no diluir la sangre.

Mezcla de oxalatos de sodio y potasio. Es otro anticoagulante conocido como "Mezcla de Paul – Heller".
Citrato de sodio al 3.8% y oxalato de sodio al 1.4%.
o   Se usa en relación de una parte de anticoagulante por cada nueve partes de sangre, habitualmente se usan 0.25ml de la solución para completar a 2.5ml de volumen total con la muestra de sangre.
o   Actúan en la misma forma que la solución anticoagulante de Wintrobe, es decir, por fijación de calcio.
o   Son los anticoagulantes de elección para tiempo de protrombina (TP) y tiempo de tromboplastina parcial (TTP).

EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético). Las sales de sodio y potasio en este ácido se comportan como poderosos anticoagulantes y son anticoagulantes de elección para el trabajo de rutina y Hematología (se utiliza al 10%).
o   No afecta la morfología de las células hemáticas.
o   No modifica la velocidad de sedimentación globular.
o   Sus sinónimos son versenato y secuestreno.

Se le llama secuestreno ya que secuestra al calcio y lo separa de la cascada de la coagulación, impidiendo que la sangre coagule. Se utilizan 0.05ml por cada 3ml de muestra de sangre. Dada la pequeña cantidad de solución, no es necesario desecarla, ya que prácticamente no diluye la sangre a analizar; en exceso afecta adversamente tanto a los eritrocitos como a los leucocitos, causando su encogimiento y provocando cambios en su forma; por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante. Se prefiere la sal tripotásica a la disódica, ya que es más soluble (10 veces más) y ello hace efectiva la mezcla del anticoagulante con la sangre.

Heparina (heparina sódica de 1,000 unidades). La fina capa de solución de heparina de 1,000 unidades:
o   Se utiliza para las gasomerías.
o   La heparina es un excelente anticoagulante.
o   No altera el tamaño de los eritrocitos.
o   Actúa inhibiendo la actividad de la trombina sobre el fibrinógeno y es este mecanismo, el que la hace diferente a los demás anticoagulantes mencionados.

ACD y CPD. Son los principales anticoagulantes utilizados en los bancos de sangre (en las bolsas para la recolección de ésta).
El ACD contiene ácido cítrico, citratos y dextrosa. En este anticoagulante la sangre se mantiene hasta 21 días.
El CPD contiene citratos, fosfatos y dextrosa. El radical es un amortiguados que favorece el pH de la sangre normal (7.4) permanezca así durante más tiempo, por lo que este anticoagulante hace que las bolsas duran 21días + 7, siempre y cuando el plasma no presente una coloración rojiza (hemólisis) ni tome un color verdusco debido a la panaglutinibilidad o contaminación bacteriana.






REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
GUYTON, C. Arthur (2001), tratado de fisiología médica, 10ed, México, MacGraw-Hill, pag 509-521.
     http://www.quiminet.com/articulos/los-diferentes-tipos-de-anticoagulantes-y-sus-caracteristicas-60747.htm




miércoles, 7 de marzo de 2018

Citometría hemática de muestras normales


Explicar el fundamento de la operación del espectrofotómetro.

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Establecer que evaluaciones de la célula, son las consideradas como sus características morfológicas, para su aplicación en la identificación de las diferentes células sanguíneas en el frotis sanguíneo teñido con colorante de Wright.

Un frotis teñido de manera adecuada tiene las siguientes características:
1.    Los eritrocitos deben ser de color rosa a salmón.
2.    Los núcleos son de color azul oscuro a violeta.
3.    Los gránulos citoplasmáticos de los neutrófilos son de color lila.
4.    Los gránulos citoplasmáticos de los basófilos son de color azul oscuro a negro.
5.    Los gránulos citoplasmáticos de los eosinofilos son de color rojo a anaranjado.

Basándose en la observación de las células sanguíneas por medio de la tinción de Wright, describir la morfología normal de cada uno de los cinco leucocitos, del eritrocito y de la plaqueta; así como las características morfológicas que permiten identificar al reticulocito al usar la tinción supravital.

Neutrófilo: tiene un tamaño de 9mm a 15mm de diámetro. El núcleo presenta entre 2 y 5 lóbulos; la cromatina condensada se tiñe de morado oscuro; el citoplasma es acidófilo y contiene gránulos primarios y específicos, pequeños y abundantes, de color rojo-rosado.
 
Eosinofilo: tiene un diámetro de 12mm a 17mm. El núcleo en forma de anteojo tiene de dos a tres lóbulos, generalmente dos acompañados de un tercero central y muy pequeño. El citoplasma está completamente lleno de gránulos gruesos, esféricos de color rojizo naranja y de tamaño uniforme distribuidos en forma regular en toda la célula.

Basófilo: su tamaño oscila entre 10µ y 13µ. El núcleo posee una cromatina densa, suele ser bilobular. El citoplasma es acidófilo, sin embargo, pocas veces se observa, ya que suele estar oculto por los gránulos. Posee gránulos grandes de color negro morado distribuidos irregularmente en todo el citoplasma, algunas veces incluso cubren el núcleo. 

Monocitos: son las células de mayor tamaño de la sangre periférica. Su tamaño oscila entre 15µ y 30µ de diámetro. El núcleo situado en posición central, es voluminoso y adopta formas abigarradas en herradura, muesca o doblado. Contienen un número variable de gránulos azurófilos y pueden contener alguna vacuola.

Eritrocito: se observa de color naranja.

Plaquetas: toman coloración violeta o purpura.

Enlistar los intervalos de referencia  (valores normales) en adultos; de eritrocitos, leucocitos, reticulocitos.

Conteo de Glóbulos Rojos:
Hombres: 4.7 a 6.1 millones de células/microlitro
Mujeres: 4.2 a 5.4 millones de células/microlitro

Conteo de Glóbulos Blancos:
4,500 a 10,000 células/microlitro

Hematocrito:
Hombres: 40.7 a 50.3%
Mujeres: 36.1 a 44.3%

Hemoglobina:
Hombres: 13.8 a 17.2 gm/dL
Mujeres: 12.1 a 15.1 gm/dL

Enlistar los intervalos de referencia en adultos de cada subpoblación leucocitaria.

Linfocitos: 1.300-4.000 /ml
Neutrófilos: 2.000-7.500 /ml
Eosinófilos: 50-500 /ml

¿Qué significan los términos: poiquilocitosis y anisocitosis; a que población hacen referencia y en general, en que situaciones clínicas se pueden presentar?

Poiquilocitosis: anormalidades en la forma.
Anisocitosis: anormalidades en el tamaño celular o volumen eritrocitario.

jueves, 1 de marzo de 2018

Plaquetas

Un falso reporte del recuento de plaquetas; ya sea una Pseudotrombocitopenia (falsamente disminuido) o Pseudotrombocitosis (Falsamente aumentado).

El fenómeno de satelitismo de plaquetas alrededor de las células sanguíneas, en especial alrededor de los neutrófilos segmentados, es un hallazgo de escaso valor hematológico por considerarse un fenómeno «in vitro» debido a cambios inducidos por el anticoagulante EDTA.

Estructura y función de las plaquetas
Las plaquetas se originan a partir del citoplasma de los megacariocitos de la médula ósea (figura 1). Las plaquetas no tienen ADN genómico, pero contienen ARN mensajero (ARNm) derivado de los megacariocitos y la maquinaria translacional necesaria para la síntesis de las proteínas. Las plaquetas circulantes tienen forma discoide, con dimensiones de aproximadamente 2.0–4.0 por 0.5 μm, y un volumen medio de 7–11 fl. Su forma y tamaño pequeño permite que las plaquetas sean empujadas hacia los bordes de los vasos sanguíneos, colocándolas en una posición óptima para la vigilancia constante de la integridad vascular. Las plaquetas circulan en concentraciones de 150,000-450,000 células/mL. De la cantidad total de plaquetas en el cuerpo, 70% se mantiene en circulación, mientras que el restante 30% permanece de manera transitoria pero constante en el bazo. Las plaquetas permanecen en circulación durante un promedio de 10 días. El bazo y el hígado se encargan de retirar a la mayoría de las plaquetas después de su senescencia, aunque una pequeña fracción se elimina constantemente como resultado de su participación en el mantenimiento de la integridad vascular.


Anormalidades morfológicas observadas en frotis de sangre de pacientes con trastornos de la función plaquetaria.


¿Qué es el síndrome de Bernard-Soulier? 
El síndrome de Bernard-Soulier es un trastorno de la función plaquetaria causado por una anomalía en los genes de la glicoproteína Ib/IX/V. Estos genes codifican para un grupo de proteínas enlazadas que normalmente se encuentran en la superficie de las plaquetas, el receptor glicoproteína Ib/IX/V (también llamado receptor del factor von Willebrand (FvW). La ausencia o el funcionamiento inadecuado de este receptor provoca que las plaquetas no se adhieran a la pared del vaso sanguíneo lesionado del modo en que deberían hacerlo y es difícil que se forme un coágulo de sangre normal.

El síndrome de Bernard-Soulier es un trastorno autosómico recesivo, lo que quiere decir que ambos padres deben ser portadores de un gen anormal (aunque ellos mismos pudieran no padecer la enfermedad) y transmitir ese gen anormal a su hijo o hija. Como todos los trastornos autosómicos recesivos, se encuentra más frecuentemente en regiones del mundo donde son comunes los matrimonios entre parientes cercanos. El síndrome de Bernard-Soulier afecta tanto a varones como a mujeres.

Síntomas 
Los síntomas del síndrome de Bernard-Soulier varían de una persona a otra. Las señales del trastorno por lo general se notan por primera vez durante la infancia.
Las personas con síndrome de Bernard-Soulier pueden presentar:

  • Propensión a los moretones
  • Hemorragias nasales
  • Hemorragia de las encías
  • Periodos menstruales abundantes o prolongados (menorragia) o hemorragia posterior al parto
  •  Hemorragias anormales posteriores a cirugías, circuncisión o trabajos dentales
  •  En raras ocasiones, vómito de sangre o sangre en heces debido a hemorragias gastrointestinales


ISI: es el índice de sensibilidad internacional determinado para cada lote de reactivos de tromboplastina por las manufacturas.