martes, 16 de junio de 2026

Generalidades bacterianas

 



Clasificación de las bacterias 

La clasificación de los seres vivos más utilizada es la propuesta por Robert Whittaker y Lynn Margulis, en 1969. En esta, los organismos se agrupan en cinco reinos: Animalia, Plantae, Fungi, Protista y Monera; en este último reino se incluyen las bacterias. Posteriormente, en 1987, Carl Woese propuso la taxonomía molecular celular, conocida como Árbol de la vida de Woese, con base en la fracción 16S del ácido ribonucleico ribosomal (ARNr). Esta clasificación agrupa las células en tres dominios: Archaea, Bacteria y Eucarya. 

Los dominios celulares Archeae y Bacteria corresponden a las células procariotas (del griego pro, primitivo, y karyon, núcleo); poseen un nucleoide sencillo, formado por material genético que carece de membrana nuclear. El dominio Archaea, llamadas arqueobacterias, son bacterias consideradas “fósiles vivientes”, porque viven en ambientes similares a los que existieron en la tierra primitiva (con temperaturas, concentración de solutos y pH extremos). La mayoría de estas bacterias son anaerobias y son los organismos más antiguos del planeta. 
Por su parte, el dominio Bacteria son las bacterias típicas conocidas como eubacterias, adaptadas a vivir en cualquier ambiente, terrestre o acuático; en este dominio se encuentran todas las bacterias de importancia clínica. 

El dominio Eucarya son las células eucariotas(eu, verdadero, karyon, núcleo); poseen un núcleo complejo, con material genético confinado en un compartimento especializado rodeado por membrana nuclear.

 Las bacterias que tienen forma esférica se denominan cocos; estos, en algunas ocasiones, son ovalados, ligeramente alargados, o con un lado plano. Las bacterias se replican por fisión binaria en el plano vertical u horizontal, y después de la replicación a veces se mantienen unidas o se separan como células individuales.

 Los cocos que se dividen en el plano vertical y se mantienen unidos (agrupados) en parejas se denominan diplococos; cuando se dividen en el plano vertical y permanecen agrupados formando cadenas se llaman estreptococos (del griego strepto, que significa cadena). 

Las que se dividen en los dos planos verticales y persisten unidas formando grupos de cuatro células se conocen como tétradas. 

Aquellos microorganismos que se dividen por los tres planos regulares (dos verticales y uno horizontal) y permanecen agrupados en grupos cúbicos de ocho células se llaman sarcinas. Los cocos que se dividen siguiendo planos al azar y se mantienen agrupados, formando racimos como los de la uva, se denominan estafilococos(staphylo, racimo). Las diferentes agrupaciones son útiles en la identificación del microorganismo (véase figura 1.3).[6-8] Las bacterias en forma de bastón o de tabaco reciben el nombre de bacilos. Los polos de la célula por lo general son redondeadas, aunque en algunas especies los extremos son afilados, y en otros son ligera o completamente planos. Los bacilos son alargados, rectos y se dividen solo por el plano vertical a través del eje más corto. La mayoría de los bacilos, después de la división celular, se mantienen en forma individual. 

Los microorganismos que tras la replicación permanecen agrupados en parejas se denominan diplobacilos y a los que se agrupan formando cadenas se les llama estreptobacilos. Existe un grupo de bacilos que son ovalados (similares a un balón de fútbol americano) y son muy parecidos a los cocos; a esta forma particular se le nombra cocobacilos.

 La tercera morfología corresponde a las espirales. Estas bacterias nunca se observan rectas como los bacilos y se denominan según el número y la longitud de giros que presentan el citoplasma y la pared celular sobre su propio eje: uno o varios giros. 

Existen tres tipos de bacterias espirales: el primer tipo son bacilos curvos en forma de coma, que se denominan vibrios. 

Otro tipo de microorganismos espirales son los espirilos; son bacterias rígidas, con morfología helicoidal, similares a un sacacorchos, con uno a tres giros sobre su eje y con movimiento por la presencia de flagelos. 

Las bacterias espirales con más de cuatro giros sobre su eje, similares a un tornillo o resorte flexible, se denominan espiroquetas. Estas se mueven por medio del filamento axial, estructura similar al flagelo localizado en el interior de la pared celular. 

Además de las tres morfologías básicas, existen células en forma de estrella (género Stella) y células planas cuadrangulares (género Arcula). También en la naturaleza existen bacterias que carecen de pared celular, como Mycoplasma spp. y Ureaplasma spp., que tienen gran plasticidad y adoptan diferentes formas. Por otro lado, algunas bacterias, como las del género Rhizobium spp. y Corynebacterium spp., son genéticamente pleomórficas (adoptan muchas morfologías).

 La morfología de la bacteria está determinada a nivel genético. Un coco siempre será un coco y un bacilo siempre será un bacilo; sin embargo, algunas condiciones ambientales alteran temporalmente la morfología bacteriana.





















BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES

 Generalidades 

Al grupo de bacilos gram negativos no fermentadores pertenecen bacterias taxonómicamente muy diversas, pero esta agrupación es útil para la clasificación en el diagnostico clínico. Muchas de estas especies son incapaces de acidificar medios como el TSI y crecen considerablemente mejor en condiciones aerobias que en condiciones anaeróbicas. Incluso se encuentran algunas cepas que son incapaces de crecer anaeróbicamente. 

Este grupo de bacterias se consideran como patógenos oportunistas, especialmente de infecciones intrahospitalarias, donde los principales factores de riesgo para los pacientes son tratamientos con antimicrobianos y/o cirugía, instrumentación y permanencia del paciente en salas de cuidados intensivos por períodos prolongados. Adicionalmente, es importante considerar la resistencia natural a los antibióticos que muchas de estas bacterias presentan y la facilidad con la que adquieren resistencia a otros antibióticos. 

A las pruebas de escrutinio que se utilizan para su identificación como morfología microscópica, oxidasa, movilidad, producción de indol y acidificación de carbohidratos, se le han agregado pruebas como el crecimiento a temperatura ambiente y crecimiento en medios selectivos como el agar MacConkey. Algunas cepas solamente crecen a temperatura ambiente y son incapaces de crecer en agar MacConkey. 

En este grupo se encuentran géneros como Acinetobacter, Moraxella, Eikenella, Flavobacterium, Alcaligenes (Achromobacter), Actinobacillus, Capnocytophaga, Cardiobacterium, Stenotrophomonas y Kingella, entre otras de menor importancia médica. Pseudomonas aeruginosa es la especie más frecuentemente aislada del grupo de bacilos Gram-negativos no fermentadores, seguida de Acinetobacter spp. y Stenotrophomonas maltophilia.

 Estos dos últimos agentes se caracterizan por producir infecciones intrahospitalarias y en su gran mayoría se asocian al uso de respiradores o al implante de catéteres. Como una característica importante, estos dos agentes presentan una elevada resistencia natural a los antibióticos y son capaces de adquirir resistencia contra otros antibióticos con facilidad. Por lo anterior, estos agentes son importantes en el ambiente hospitalario y son cada vez más frecuentes los aislamientos de estas bacterias produciendo infecciones severas. 

La especie Stenotrophomonas maltophilia ha sufrido una serie de cambios taxonómicos. Inicialmente, fue clasificada como Pseudomonas maltophilia, luego se reclasificó en el género Xanthomonas y hasta años recientes que se le asignó a un nuevo género denominado Stenotrophomonas. 

Esta bacteria es un bacilo no fermentador, que produce colonias en agar sangre de tono amarillento, crema claro o verde lavanda, opacas y con un fuerte olor amoniacal. Si se crece en agar nutritivo, sus colonias presentan una coloración amarillenta, con un pigmento soluble en agua pero que no difunde al agar. Esta especie es móvil, utiliza la maltosa, es oxidasa negativo y ONPG positiva. S. maltophilia se asocia como agente de neumonías primarias e infecciones nosocomiales como septicemias, infecciones urinarias, bronconeumonías por aspiración, infecciones de heridas, mastoiditis y ectima gangrenoso. Es importante en infecciones de pacientes con cáncer.


Las especies de Acinetobacter se caracterizan por ser bacilos pequeños o bien cocobacilos, son no móviles, oxidasa negativa y pueden tener una morfología en pares (diplococo). Sus colonias en agar sangre no son característicos (producen colonias planas, opacas y pequeñas), crecen bien en agar MacConkey, pero con colonias de pequeño tamaño, incoloras o bien escasamente pigmentadas de rosado. 

En infecciones vaginales, es importante descartar la presencia de Acinetobacter spp. ya que puede presentar una morfología semejante Neisseria gonorrhoeae. La diferenciación se puede hacer mediante la prueba de crecimiento en agar MacConkey y la prueba de citocromo C oxidasa. A diferencia de Acinetobacter spp, Neisseria gonorrhoeae no crece en MacConkey y es oxidasa positivo. Las especies de Acinetobacter están ampliamente distribuidas en la naturaleza tanto en ambientes húmedos como en superficies secas y pueden ser parte de la flora normal de la piel y mucosas de los seres humanos. 

Las especies mas frecuentes aisladas son A.baumannii, A. iwoffi, A. haemolyticus, y A. johnsonii. Otros bacilos gram negativos no fermentadores tienen bajos porcentajes de aislamiento en muestras clínicas, por lo que su importancia es mucho menor. Sin embargo tienen características epidemiológicas y reacciones bioquímicas semejantes a los dos agentes indicados anteriormente. 

Todos los bacilos Gram negativos no fermentadores presentan una amplia resistencia a los antimicrobianos, son organismos que causan infecciones intrahospitalarias y tienen su origen en ambientes acuáticos. Las especies de Moraxella son cocobacilos oxidasa positiva, no móviles y se presentan como asacarolítico porque es inerte a los carbohidratos. Estas especies pueden encontrarse como flora normal de piel y mucosas. Se ha demostrado que por lo menos Moraxella osloensis, M. liquefaciens y M. lincolnii son flora normal de vías respiratorias humanas, aunque rara vez se encuentran produciendo bacteremia, endocarditis, conjuntivitis y meningitis.

 Moraxella catarralis es frecuente en infecciones óticas en niños. Oligella spp. son un grupo de cocobacilos, siendo las especies más importantes de este grupo Oligella urethralis y Oligella ureolytica, que se han encontrado produciendo infecciones urinarias. Eikenella spp. son también flora normal gingival e intestinal. La especie más importante es Eikenella corrodens, un bacilo Gram negativo oxidada positivo, se ha encontrado produciendo infecciones locales por mordeduras humanas. 

 La especie Chryseobacterium (Flavobacterium) meningosepticum es una bacteria no móvil, oxidasa positiva que produce un pigmento amarillo. Es un agente causante de meningitis y sepsis neonatal, aunque es muy raro encontrar esta especie en infecciones de adultos. Esta especie coloniza vías respiratorias, por lo que es frecuente encontrarlo en aislamientos de muestras clínicas humanas. 

Las especies de Alcaligenes son bacilos móviles por flagelos peritricos que están bioquímica y filogenéticamente muy relacionados con Bordetella. Al cultivarlas, las colonias presentan olor a frutas y produce un color verdoso en el agar sangre. Se encuentran frecuentemente contaminando nebulizadores y respiradores.

Las especies más importantes en muestras clínicas son A. faecalis, A. piechaudii, A. xylosoxidans subsp. denitrificans y A. xylsoxidans subsp. xylosoxidans. Otros grupos menos frecuentes incluyen Actinobacillus actinomycetemcomitans, un cocobacilo involucrado en enfermedad periodontal y Capnocytophaga, bacilos fusiformes filamentosos de la flora normal de boca, aunque C. gingivalis produce enfermedad periodontal en humanos y C. canimorsis es flora normal de perros por lo que se encuentra produciendo infecciones en heridas por mordeduras de perros. Adicionalmente se incluyen en este heterogéneo grupo de bacterias a Cardiobacterium hominis, un bacilo pleomórfico causante de endocarditis que crecen lentamente en agar sangre, por lo que se debe incubar el medio por dos o tres semanas. Chromobacterium violaceum es una bacteria muy similar a Pseudomonas pero se diferencia por producir un pigmento violeta. 

Esta especie produce abscesos y diarrea y las infecciones con esta bacteria, aunque infrecuentes, tienen una alta tasa de mortalidad. 2. Clasificación de los diferentes géneros y especies de bacilos Gram negativos, no fermentadores, distintos a Pseudomonas y Burkholderia. 

 A continuación se brindan una serie de cuadros que pueden ser utilizados como una guía para la identificación de bacilos Gram negativos, no fermentadores, diferentes a Pseudomonas y Burkholderia. Nótese que se utilizan las mismas pruebas bioquímicas para la identificación de este grupo-. 

El cuadro 1 puede ser utilizado para la orientación inicial en la identificación. Mientras que los cuadros 2-7 se utilizan en la identificación final a nivel de especie.


Cuadro 1. Esquema para la identificación de bacilos Gram-negativos no fermentadores diferentes a Pseudomonas y Burkholderia.



Cuadro 2. Bacilos Gram-negativos, no fermentadores, oxidasa negativa, indol negativo.



Cuadro 3. Características fenotípicas de especies de Acinetobacter



Cuadro 4. Cocobacilos Gram-negativos, asacarolíticos, oxidasa-positivos, indol negativos

 


Cuadro 5. Bacilos Gram-negativos, no cocoides, asacarolíticos, oxidasa positivos, indol negativos



Cuadro 6. Bacilos Gram-negativos, no cocoides, sacarolíticos, no fermentadores, oxidasa positivos, indol negativos



Cuadro 7. Bacilos Gram-negativos, no fermentadores, oxidasa positiva, indol positivo, no móviles



jueves, 11 de junio de 2026

PSEUDOMONAS Y BURKHOLDERIA

 PSEUDOMONAS Y BURKHOLDERIA 

Generalidades de Pseudomonas y Burkholderia

 Las especies pertenecientes a los géneros Pseudomonas y Burkholderia son en general catalasa y oxidasa positivas. Morfológicamente indistinguibles al Gram, se presentan como bacilos Gram negativos rectos o ligeramente curvos. Su tamaño oscila entre 1 a 5 µm de largo y 0.5 a 1 µm de ancho. 

Son aerobios, aunque algunas cepas pueden crecer bajo condiciones anaeróbicas usando el nitrato como aceptor final de electrones. No forman esporas y son móviles con 1 o más flagelos polares a excepción de B mallei, el cual no es móvil. 

Estos grupos tienen requerimientos nutricionales mínimos y crecen en agar MacConkey como no fermentadores de lactosa. Las especies de éstos géneros pueden encontrarse ampliamente distribuidos en el ambiente; suelos, agua y formando parte de la flora normal de animales y del hombre. Debido a su habilidad de sobrevivir en ambientes húmedos y de poseer una resistencia innata a los antibióticos, este patógeno es particularmente importante en infecciones intrahospitalarias. 

Como son agentes patógenos oportunistas, pueden producir infecciones serias en pacientes con compromiso inmunológico; convirtiéndose así en agentes importantes de infecciones nosocomiales. La virulencia de éstos agentes radica en su capacidad de colonizar varios sitios anatómicos humanos, la propiedad para invadir tejidos y producir daño tisular. Además de la tendencia característica de invadir torrente sanguíneo.

 P aeruginosa puede encontrase produciendo infecciones en piel de pacientes quemados, en esputos de pacientes con fibrosis quística y una gran variedad de infecciones. P fluorescens puede producir bacteremia en pacientes transfundidos debido a su capacidad de crecer a 4ºC, ambiente bajo el cual se almacena la sangre en los Bancos de Sangre. P stutzeri y P versicularis han sido reportados produciendo bacteremias en pacientes hemodializados, por encontrarse contaminado el equipo de diálisis renal. P. alcaligenes se ha reportado produciendo endocarditis asociado a infección por contaminación de un catéter en un paciente con transplante de médula ósea. B pseudomallei produce la melioidosis en animales, transmisible a humanos. B cepacia se asocia con bacteremias e infecciones del tracto urinario, particularmente cuando se hace uso de catéteres. B mallei, B picketii y B gladioli no son importantes en infecciones en humanos. 

 Los géneros Pseudomonas y Burkholderia pertenecen, entre otras bacterias, a un grupo conocido como bacilos Gram negativos no fermentadores - no fastidiosos. Este grupo es muy heterogéneo, se encuentran géneros móviles y no móviles, inertes a los carbohidratos y otros que son capaces de utilizar carbohidratos vía oxidativa. Pero en general, se caracterizan por ser aerobios estrictos y tener requerimientos nutricionales mínimos. Las especies de Pseudomonas se clasifican según el grado de homología que haya en el ARNr de manera que se han descrito las especies: P. aeruginosa, P. fluorescens, P. stutzeri, P. alcaligenes, P. putida y P. versicularis. Existe otro género conocido como Burkholderia donde se han agrupado otras especies que pertenecieron anteriormente al género de las Pseudomonas. 

Entre ellas están: B. cepacia, B. pseudomallei, B. picketii, B. mallei entre otras.


El grupo de bacilos gram negativos no fermentadores no fastidiosos incluyen los siguientes géneros:



Morfología colonial en medios de aislamiento primario 

 A continuación se describe la morfología colonial de algunas especies observada en medios selectivos y diferenciales. 

Agar Sangre. Este medio es utilizado para el aislamiento primario de la mayoría de las cepas cultivables en el laboratorio, que producen patologías en seres humanos. A las 18 horas de incubación se observan colonias medianas de 2 a 3 mm de diámetro y brillantes. 

La mayoría de las cepas no producen hemólisis, pero en algunas cepas es posible apreciarla debido a la producción de una esfingomielinasa que es capaz de lisar los eritrocitos del medio. 

Algunas veces se puede observar la producción de pigmentos como la pioverdina, que se aprecia como una coloración verdosa que difunde en el agar. 

Agar MacConkey. Igual al anterior separa las bacterias que utilizan fermentativamente la lactosa, de los que no la utilizan. Para ambos casos, tanto Pseudomonas como Burkholderia presentan colonias translúcidas lactosa negativa. 3. Pruebas bioquímicas de identificación

 • Agar OF. Se usa para determinar el comportamiento metabólico de los bacilos gram negativos ante diferentes carbohidratos. Se puede observar si lo utiliza o no, y si lo hace oxidativamente o fermentativamente. 

Los tubos con medio OF se mantienen en agua hirviendo por 10 minutos para eliminar el oxígeno que se encuentre en el medio. Después se deja enfriar y se procede a inocular. Para el caso de la glucosa, se requiere de un tubo sellado con VASPAR y uno con atmósfera aerobia. Los demás carbohidratos NO se sellan con VASPAR. 

Agar Almidón. Determina la producción de enzimas que producen la hidrólisis del almidón. Si la bacteria es capaz de hidrolizar almidón, al agregarle yodo al medio, quedará un halo transparente alrededor de la colonia. Este halo evidencia así la presencia de almidón hidrolizado. Este medio se raya por estría.

 • Agar F. Se utiliza para determinar la producción de pioverdina pues inhibe la producción de piocianina. 

AgarP. Se utiliza para determinar la producción de piocianina debido a que inhibe la producción de pioverdina.



Clasificación de las especies clínicamente importantes de los géneros Pseudomonas y Burkholderia 




Cuadro 2. Características fenotípicas de especies del género Burkholderia





 
Pseudomonas aeruginosa en agar Sangre, 48 hrs de incubación



Pseudomonas aeruginosa en agar Mac conkey, 48 hrs de incubación



Pseudomonas aeruginosa en agar CLED, 48 hrs de incubación



Pseudomonas aeruginosa en agar Mueller Hinton, 48 hrs de incubación





Burkholderia cepacia en agar Mueller Hinton, 48 hrs de incubación


Burkholderia cepacia en agar CLED, 48 hrs de incubación


 Burkholderia cepacia en agar Mac conkey, 48 hrs de incubación



Burkholderia cepacia en agar Sangre, 48 hrs de incubación




miércoles, 10 de junio de 2026

Generalidades de la familia Vibrionaceae


VIBRIONACEAE 

Generalidades de la familia Vibrionaceae. 

La familia Vibrionaceae incluye los géneros Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas y Photobacterium. Las diferentes especies de Vibrio y los otros géneros que se aíslan de muestras clínicas presentan características bioquímicas similares a las de los géneros de la familia Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros géneros relacionados.

Las especies de Vibrio se caracterizan por ser bacilos Gram-negativos aerobios, con una estructura celular curva, tienen motilidad y poseen un flagelo polar, no forman esporas, miden de 0.5 a 0.8 µm de diámetro por 1.4 a 2.6 µm de largo. Las especies de Vibrio crecen en presencia o ausencia de oxígeno. Todas estas especies producen la enzima citocromo C oxidasa (excepto la especie Vibrio metschnikovi), fermentan la glucosa y algunos producen gas. El cloruro de sodio estimula el crecimiento y algunas especies son estrictamente halofílicas. 

El género Vibrio contiene más de 30 especies y 12 de éstas son especies patógenas para el ser humano. Los géneros Aeromonas y Plesiomonas se conforman por bacilos Gram-negativos, móviles por flagelos polares y anaerobios facultativos. Sin embargo, con bases genéticas se ha propuesto que Aeromonas debería constituir su propia familia y que Plesiomonas está más relacionada a la familia Enterobacteriaceae. Pueden distinguirse de las bacterias entéricas en medios diferenciales que se usan para cultivarlas y por la reacción positiva a la prueba de oxidasa.

 El patógeno más reconocido de la familia Vibrionaceae es Vibrio cholerae por la diarrea fatal que puede llegar a producir, otras especies del género Vibrio, como V. parahaemolyticus, V. alginolyticus y V. mimicus se asocian tanto a infecciones intestinales como a extraintestinales. Las especies de Aeromonas son de vida libre y se encuentran en agua dulce y, en ocasiones, en reptiles, anfibios, peces y en el suelo o los alimentos, su importancia primaria en microbiología médica es en relación con la diarrea y a veces causan infecciones de heridas en agua dulce o infecciones en pacientes inmunocomprometidos y, raramente, otras infecciones intestinales. Las especies de Plesiomonas son más comunes en áreas tropicales y subtropicales; se han aislado de peces de agua dulce y numerosos animales. La mayor parte de Plesiomonas aisladas de humanos se ha obtenido de cultivo de heces de pacientes con diarrea. Las especies de la familia Vibrionaceae son capaces de crecer en la mayoría de los medios rutinarios de laboratorio, incluyendo agar sangre y agar MacConkey. Las colonias producidas en estos medios son muy similares a las producidas por especies de la familia Enterobacteriaceae. Sin embargo, debido a que algunas especies son específicamente halofílicas, es necesario agregar una concentración final de 1% NaCl a aquellos medios que carecen de sal. Usualmente es necesario hacer un enriquecimiento de estas bacterias a partir de los diferentes tipos de muestras en Agua Peptonada Alcalina (APA) a 35o C por 6-12 horas en aerobiosis para aumentar la recuperación en los medios de aislamiento primario. 
El medio de aislamiento primario más recomendado para la recuperación de las especies de Víbrio es el agar TCBS. Las placas de agar TCBS se incuban hasta por 48 horas antes de descartarlas. Es importante examinar cuidadosamente el crecimiento y el color de las colonias en las placas de agar TCBS.

Es importante observar que en este medio, aunque es selectivo, pueden crecer algunas especies entéricas como Proteus y Enterococcus, pero sus colonias son usualmente pequeñas y translúcidas. Las colonias de las especies de Proteus que fermentan sacarosa producen colonias amarillas que deben ser diferenciadas de las de Vibrio. Pseudomonas y Aeromonas pueden crecer en placas de agar TCBS y usualmente forman colonias azules. Aeromonas crece en medios diferenciales como el MacConkey y Levine, aunque puede ser aislado en placas de agar sangre (con 5% en sangre de cordero) conteniendo ampicilina a una concentración final de 10 µg/ml. Plesiomonas crece en medios diferenciales como el agar MacConkey y en medios moderadamente selectivos como el agar Hektoen. 

El medio de Hektoen es recomendado también para el aislamiento de Salmonella, Shigella y Vibrio, por cuanto suprime el crecimiento de la mayoría de los miembros de la familia Enterobacteriaceae y detecta la producción de ácido de la fermentación de azúcar y H2S. Las colonias de Plesiomonas se ven azul o azul verdoso con centro o sin centro negro. 




Pruebas bioquímicas para la identificación de géneros y especies de la familia Vibrionaceae 

 Para la identificación bioquímica de las especies de la familia Vibrionaceae se deben realizar las mismas pruebas descritas para Enterobacteriaceae. Sin embargo, una vez realizado el aislamiento primario es esencial determinar si la bacteria es halofílica inoculando un caldo nutritivo conteniendo 0% y 3% de NaCl y se incuba a 35o C por 18-24 horas. Si la bacteria crece en presencia de 3% de NaCl pero no crece en el medio con 0% de NaCl, se puede concluir que la bacteria es halofílica. En caso que se determine que la bacteria es halofílica, es necesario agregar NaCl a una concentración final de 1% a los siguientes medios antes de realizar las correspondientes pruebas bioquímicas: 
  • Caldo MRVP
  •  Caldo Triptona 
  • Caldo Base de Moeller 
  • Caldo Malonato
  •  Caldo Nitratos con campana de Durham 
  • Caldo Base Púrpura Bromocresol 
  • Medio Gelatina




Cuadro 3. Clasificación de especies de los géneros Aeromonas y Plesiomonas clínicamente importantes.



 

Enterobacterias - Identificación

 ENTEROBACTERIACEAE 

 Generalidades de la familia Enterobacteriaceae 

 Las especies de la familia Enterobacteriaceae se caracterizan por ser bacilos Gramnegativos que no forman esporas, móviles por flagelos peritricos o no móviles, crecen aeróbica o anaeróbicamente, la glucosa es metabolizada de forma fermentativa, producen la enzima catalasa, no tienen actividad de citocromo C oxidasa y reducen los nitratos a nitritos. De modo típico estos microorganismos producen en agar sangre colonias relativamente grandes, de color gris opaco, secas. La hemólisis en agar sangre es variable y no es característica de ningún género o grupo en particular. La apariencia mucoide de las colonias sugieren la presencia de una cápsula de polisacáridos extracelulares como en el caso de Klebsiella pneumoniae. Las colonias que aparecen como una película delgada o como ondas (swarming) sugieren que el microorganismo es móvil y probablemente sea una especie de Proteus. 

 Las especies de la familia Enterobacteriaceae están ampliamente distribuidas en plantas, suelos, aguas e intestino de animales y humanos y su diferenciación se basa principalmente en la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano. Los sustratos con los cuales pueden reaccionar estas enzimas se incorporan al medio de cultivo junto con indicadores que detectan la utilización del sustrato o la presencia de productos metabólicos específicos, estableciéndose así un perfil bioquímico para hacer la identificación de especie. Estos microorganismos están asociados a diferentes cuadros clínicos en seres humanos, incluyendo la formación de abscesos, neumonías, meningitis, septicemias, infecciones de tracto urinario e intestinal, entre otros. Las bacterias de esta familia forman la mayor parte de la flora normal intestinal y muchas de las especies son importantes en las infecciones nosocomiales.


Morfologia colonial en medios de aislamiento primario 

 A continuación se describe la morfología colonial de algunas especies observada en medios selectivos y diferenciales. 

Agar bismuto-sulfito. 

Este medio es utilizado para el aislamiento de Salmonella typhi mostrando a las 18 horas de incubación colonias negras con brillo metálico a su alrededor y después de 48 horas son completamente negras. Otras especies de Salmonella a las 18 horas se observan de color verde-negruzco y después de 48 horas son uniformemente negras. Las demás enterobacterias son de color verde-café sin brillo metálico. 

Agar Hektoen. 

Se usa en el aislamiento de Shigella spp. y de Salmonella spp., las cuales presentan colonias verdes y colonias azul-verdoso con o sin centro negro, respectivamente. Los demás coliformes presentan colonias rosado-salmón. Algunas especies de Proteus pueden ser semejantes a Salmonella o a Shigella. 

Agar Salmonella-Shigella. 

Se utiliza principalmente para aislar bacterias lactosa-negativa como Salmonella y Shigella, que provienen de aguas, alimentos y muestras clínicas. Salmonella presenta colonias translúcidas con una zona negra en el centro, mientras que Shigella presenta colonias translúcidas. Especies de la familia Enterobacteriaceae lactosapositivas, como Escherichia coli, presentan colonias rosadas. 

Agar Tergitol 7. 

Este medio permite también diferenciar especies fermentadoras de la lactosa de las especies no fermentadoras. Salmonella y Shigella presentan colonias rojas, mientras que Escherichia coli y Klebsiella producen colonias amarillas y verde-amarillo, respectivamente. 

Agar MacConkey. 

Igual al anterior separa las bacterias fermentadoras de la lactosa. Escherichia coli produce colonias rosadas, mientras que Salmonella y Shigella producen colonias translúcidas. 

Agar Eosina-Azul de Metileno (EMB) de Levine. 

Permite la diferenciación de especies fermentadoras de la lactosa. Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli presentan colonias que varían de púrpura a verde metálico. Shigella y Salmonella producen colonias translúcidas.  


Pruebas bioquímicas para identificación de géneros y especies de la familia Enterobacteriaceae 

Agar TSI. Es un medio de cultivo diferencial basado en la capacidad de los bacilos Gram negativos de fermentar carbohidratos, producir H2S y producir gas. 

Prueba de orto-nitrofenil-β-galactopiranósido (ONPG). Esta prueba detecta la producción de la enzima β-galactosidasa y permite diferenciar organismos de lenta utilización de la lactosa de aquellos que no la utilizan. La enzima β-galactosidasa es codificada por el gen lacZ del operón lactosa, el cual es inducido en presencia de lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.

 • Prueba de movilidad. Para determinar la movilidad de los bacilos fermentadores. 

Prueba de gelatinasa. Determina la producción de la enzima gelatinasa, la cual produce la hidrólisis de la gelatina.

 • Prueba de rojo de metilo (RM). Identifica especies de bacterias que producen ácidos fuertes a partir de glucosa.

 • Prueba de Voges-Proskauer (VP). Esta prueba detecta la producción de acetilmetilcarbinol (acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosférico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de α- naftol y creatina. La producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico, donde se producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar una prueba de RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa. 

Prueba de fenilalanina desaminasa. La determinación de la enzima fenilalanina desaminasa es útil en la diferenciación inicial de especies de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos Gram negativos. 

Producción de descarboxilasas y de dehidrolasas de aminoácidos. Muchas especies de bacterias poseen enzimas capaces de descarboxilar o de hidrolizar aminoácidos específicos, como arginina, lisina y ornitina, en un determinado medio de prueba, con lo cual liberan aminas de reacción alcalina y CO2

Prueba de ureasa. Los microorganismos que poseen la enzima ureasa hidrolizan urea liberando amoníaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de Christensen permite la detección de menores cantidades de amoníaco por lo que aquellos organismos que producen menores cantidades de ureasa se evalúan con este método, incluyendo Klebsiella, Enterobacter, Brucella y Bordetella bronchiseptica.

 • Producción de indol. El indol es uno de los productos de degradación del metabolismo del aminoácido triptofano. Para su detección la bacteria es cultivada en caldo triptona y posteriormente se utiliza el reactivo de Ehrlich, el cual es más sensible que el reactivo de Kovacs cuando se evalúan bacilos no fermentadores o anaerobios cuya producción de indol es mínima. 

Utilización de citrato. Esta prueba tiene como objetivo determinar la capacidad de un microorganismo de utilizar citrato de sodio como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento.

Utilización de malonato. Determina la capacidad de algunas bacterias de utilizar el malonato como fuente de carbono y energía. 

Prueba de reducción de nitratos. Determina la capacidad de reducir el nitrato a nitrito o gas. Es útil en la identificación de la familia Enterobacteriaceae y en la diferenciación de especies de muchos otros grupos de microorganismos. 

Prueba de fermentación de carbohidratos. Se recomienda el uso del caldo base púrpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una concentración del 1% para la determinación de la fermentación de carbohidratos y alcoholes para especies de la familia Enterobacteriaceae.



Clasificación por especie de los géneros clínicamente más importantes de la familia Enterobacteriaceae  














 
Salmonella choclorae-suis en agar Mac conkey


Morganella morganii en agar Mac conkey


E. coli en agar Mac conkey, 72 hrs incubación


Enterobacter cloacae en agar Mac conkey, 48 hrs incubación


klebsiella oxytoca en Agar Mac conkey, 48 hrs de incubación





Proteus sp en Agar Mac conkey, 48 hrs de incubación