PSEUDOMONAS Y BURKHOLDERIA 

Generalidades de Pseudomonas y Burkholderia

 Las especies pertenecientes a los géneros Pseudomonas y Burkholderia son en general catalasa y oxidasa positivas. Morfológicamente indistinguibles al Gram, se presentan como bacilos Gram negativos rectos o ligeramente curvos. Su tamaño oscila entre 1 a 5 µm de largo y 0.5 a 1 µm de ancho. 

Son aerobios, aunque algunas cepas pueden crecer bajo condiciones anaeróbicas usando el nitrato como aceptor final de electrones. No forman esporas y son móviles con 1 o más flagelos polares a excepción de B mallei, el cual no es móvil. 

Estos grupos tienen requerimientos nutricionales mínimos y crecen en agar MacConkey como no fermentadores de lactosa. Las especies de éstos géneros pueden encontrarse ampliamente distribuidos en el ambiente; suelos, agua y formando parte de la flora normal de animales y del hombre. Debido a su habilidad de sobrevivir en ambientes húmedos y de poseer una resistencia innata a los antibióticos, este patógeno es particularmente importante en infecciones intrahospitalarias. 

Como son agentes patógenos oportunistas, pueden producir infecciones serias en pacientes con compromiso inmunológico; convirtiéndose así en agentes importantes de infecciones nosocomiales. La virulencia de éstos agentes radica en su capacidad de colonizar varios sitios anatómicos humanos, la propiedad para invadir tejidos y producir daño tisular. Además de la tendencia característica de invadir torrente sanguíneo.

 P aeruginosa puede encontrase produciendo infecciones en piel de pacientes quemados, en esputos de pacientes con fibrosis quística y una gran variedad de infecciones. P fluorescens puede producir bacteremia en pacientes transfundidos debido a su capacidad de crecer a 4ºC, ambiente bajo el cual se almacena la sangre en los Bancos de Sangre. P stutzeri y P versicularis han sido reportados produciendo bacteremias en pacientes hemodializados, por encontrarse contaminado el equipo de diálisis renal. P. alcaligenes se ha reportado produciendo endocarditis asociado a infección por contaminación de un catéter en un paciente con transplante de médula ósea. B pseudomallei produce la melioidosis en animales, transmisible a humanos. B cepacia se asocia con bacteremias e infecciones del tracto urinario, particularmente cuando se hace uso de catéteres. B mallei, B picketii y B gladioli no son importantes en infecciones en humanos. 

 Los géneros Pseudomonas y Burkholderia pertenecen, entre otras bacterias, a un grupo conocido como bacilos Gram negativos no fermentadores - no fastidiosos. Este grupo es muy heterogéneo, se encuentran géneros móviles y no móviles, inertes a los carbohidratos y otros que son capaces de utilizar carbohidratos vía oxidativa. Pero en general, se caracterizan por ser aerobios estrictos y tener requerimientos nutricionales mínimos. Las especies de Pseudomonas se clasifican según el grado de homología que haya en el ARNr de manera que se han descrito las especies: P. aeruginosa, P. fluorescens, P. stutzeri, P. alcaligenes, P. putida y P. versicularis. Existe otro género conocido como Burkholderia donde se han agrupado otras especies que pertenecieron anteriormente al género de las Pseudomonas. 

Entre ellas están: B. cepacia, B. pseudomallei, B. picketii, B. mallei entre otras.

El grupo de bacilos gram negativos no fermentadores no fastidiosos incluyen los siguientes géneros:

Morfología colonial en medios de aislamiento primario 

 A continuación se describe la morfología colonial de algunas especies observada en medios selectivos y diferenciales. 

• Agar Sangre. Este medio es utilizado para el aislamiento primario de la mayoría de las cepas cultivables en el laboratorio, que producen patologías en seres humanos. A las 18 horas de incubación se observan colonias medianas de 2 a 3 mm de diámetro y brillantes. 

La mayoría de las cepas no producen hemólisis, pero en algunas cepas es posible apreciarla debido a la producción de una esfingomielinasa que es capaz de lisar los eritrocitos del medio. 

Algunas veces se puede observar la producción de pigmentos como la pioverdina, que se aprecia como una coloración verdosa que difunde en el agar. 

• Agar MacConkey. Igual al anterior separa las bacterias que utilizan fermentativamente la lactosa, de los que no la utilizan. Para ambos casos, tanto Pseudomonas como Burkholderia presentan colonias translúcidas lactosa negativa. 3. Pruebas bioquímicas de identificación

 • Agar OF. Se usa para determinar el comportamiento metabólico de los bacilos gram negativos ante diferentes carbohidratos. Se puede observar si lo utiliza o no, y si lo hace oxidativamente o fermentativamente. 

Los tubos con medio OF se mantienen en agua hirviendo por 10 minutos para eliminar el oxígeno que se encuentre en el medio. Después se deja enfriar y se procede a inocular. Para el caso de la glucosa, se requiere de un tubo sellado con VASPAR y uno con atmósfera aerobia. Los demás carbohidratos NO se sellan con VASPAR. 

Agar Almidón. Determina la producción de enzimas que producen la hidrólisis del almidón. Si la bacteria es capaz de hidrolizar almidón, al agregarle yodo al medio, quedará un halo transparente alrededor de la colonia. Este halo evidencia así la presencia de almidón hidrolizado. Este medio se raya por estría.

 • Agar F. Se utiliza para determinar la producción de pioverdina pues inhibe la producción de piocianina. 

• AgarP. Se utiliza para determinar la producción de piocianina debido a que inhibe la producción de pioverdina.

Clasificación de las especies clínicamente importantes de los géneros Pseudomonas y Burkholderia 

Cuadro 2. Características fenotípicas de especies del género Burkholderia

 

Pseudomonas aeruginosa en agar Sangre, 48 hrs de incubación

Pseudomonas aeruginosa en agar Mac conkey, 48 hrs de incubación

Pseudomonas aeruginosa en agar CLED, 48 hrs de incubación

Pseudomonas aeruginosa en agar Mueller Hinton, 48 hrs de incubación

Burkholderia cepacia en agar Mueller Hinton, 48 hrs de incubación

Burkholderia cepacia en agar CLED, 48 hrs de incubación

 Burkholderia cepacia en agar Mac conkey, 48 hrs de incubación

Burkholderia cepacia en agar Sangre, 48 hrs de incubación

Generalidades de la familia Vibrionaceae

VIBRIONACEAE 

Generalidades de la familia Vibrionaceae. 

La familia Vibrionaceae incluye los géneros Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas y Photobacterium. Las diferentes especies de Vibrio y los otros géneros que se aíslan de muestras clínicas presentan características bioquímicas similares a las de los géneros de la familia Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros géneros relacionados.

Las especies de Vibrio se caracterizan por ser bacilos Gram-negativos aerobios, con una estructura celular curva, tienen motilidad y poseen un flagelo polar, no forman esporas, miden de 0.5 a 0.8 µm de diámetro por 1.4 a 2.6 µm de largo. Las especies de Vibrio crecen en presencia o ausencia de oxígeno. Todas estas especies producen la enzima citocromo C oxidasa (excepto la especie Vibrio metschnikovi), fermentan la glucosa y algunos producen gas. El cloruro de sodio estimula el crecimiento y algunas especies son estrictamente halofílicas. 

El género Vibrio contiene más de 30 especies y 12 de éstas son especies patógenas para el ser humano. Los géneros Aeromonas y Plesiomonas se conforman por bacilos Gram-negativos, móviles por flagelos polares y anaerobios facultativos. Sin embargo, con bases genéticas se ha propuesto que Aeromonas debería constituir su propia familia y que Plesiomonas está más relacionada a la familia Enterobacteriaceae. Pueden distinguirse de las bacterias entéricas en medios diferenciales que se usan para cultivarlas y por la reacción positiva a la prueba de oxidasa.

 El patógeno más reconocido de la familia Vibrionaceae es Vibrio cholerae por la diarrea fatal que puede llegar a producir, otras especies del género Vibrio, como V. parahaemolyticus, V. alginolyticus y V. mimicus se asocian tanto a infecciones intestinales como a extraintestinales. Las especies de Aeromonas son de vida libre y se encuentran en agua dulce y, en ocasiones, en reptiles, anfibios, peces y en el suelo o los alimentos, su importancia primaria en microbiología médica es en relación con la diarrea y a veces causan infecciones de heridas en agua dulce o infecciones en pacientes inmunocomprometidos y, raramente, otras infecciones intestinales. Las especies de Plesiomonas son más comunes en áreas tropicales y subtropicales; se han aislado de peces de agua dulce y numerosos animales. La mayor parte de Plesiomonas aisladas de humanos se ha obtenido de cultivo de heces de pacientes con diarrea. Las especies de la familia Vibrionaceae son capaces de crecer en la mayoría de los medios rutinarios de laboratorio, incluyendo agar sangre y agar MacConkey. Las colonias producidas en estos medios son muy similares a las producidas por especies de la familia Enterobacteriaceae. Sin embargo, debido a que algunas especies son específicamente halofílicas, es necesario agregar una concentración final de 1% NaCl a aquellos medios que carecen de sal. Usualmente es necesario hacer un enriquecimiento de estas bacterias a partir de los diferentes tipos de muestras en Agua Peptonada Alcalina (APA) a 35o C por 6-12 horas en aerobiosis para aumentar la recuperación en los medios de aislamiento primario. 

El medio de aislamiento primario más recomendado para la recuperación de las especies de Víbrio es el agar TCBS. Las placas de agar TCBS se incuban hasta por 48 horas antes de descartarlas. Es importante examinar cuidadosamente el crecimiento y el color de las colonias en las placas de agar TCBS.

Es importante observar que en este medio, aunque es selectivo, pueden crecer algunas especies entéricas como Proteus y Enterococcus, pero sus colonias son usualmente pequeñas y translúcidas. Las colonias de las especies de Proteus que fermentan sacarosa producen colonias amarillas que deben ser diferenciadas de las de Vibrio. Pseudomonas y Aeromonas pueden crecer en placas de agar TCBS y usualmente forman colonias azules. Aeromonas crece en medios diferenciales como el MacConkey y Levine, aunque puede ser aislado en placas de agar sangre (con 5% en sangre de cordero) conteniendo ampicilina a una concentración final de 10 µg/ml. Plesiomonas crece en medios diferenciales como el agar MacConkey y en medios moderadamente selectivos como el agar Hektoen. 

El medio de Hektoen es recomendado también para el aislamiento de Salmonella, Shigella y Vibrio, por cuanto suprime el crecimiento de la mayoría de los miembros de la familia Enterobacteriaceae y detecta la producción de ácido de la fermentación de azúcar y H2S. Las colonias de Plesiomonas se ven azul o azul verdoso con centro o sin centro negro. 

Pruebas bioquímicas para la identificación de géneros y especies de la familia Vibrionaceae 

 Para la identificación bioquímica de las especies de la familia Vibrionaceae se deben realizar las mismas pruebas descritas para Enterobacteriaceae. Sin embargo, una vez realizado el aislamiento primario es esencial determinar si la bacteria es halofílica inoculando un caldo nutritivo conteniendo 0% y 3% de NaCl y se incuba a 35o C por 18-24 horas. Si la bacteria crece en presencia de 3% de NaCl pero no crece en el medio con 0% de NaCl, se puede concluir que la bacteria es halofílica. En caso que se determine que la bacteria es halofílica, es necesario agregar NaCl a una concentración final de 1% a los siguientes medios antes de realizar las correspondientes pruebas bioquímicas: 

• Caldo MRVP
•  Caldo Triptona 
• Caldo Base de Moeller 
• Caldo Malonato
•  Caldo Nitratos con campana de Durham 
• Caldo Base Púrpura Bromocresol 
• Medio Gelatina

Cuadro 3. Clasificación de especies de los géneros Aeromonas y Plesiomonas clínicamente importantes.

 

Enterobacterias - Identificación

 ENTEROBACTERIACEAE 

 Generalidades de la familia Enterobacteriaceae 

 Las especies de la familia Enterobacteriaceae se caracterizan por ser bacilos Gramnegativos que no forman esporas, móviles por flagelos peritricos o no móviles, crecen aeróbica o anaeróbicamente, la glucosa es metabolizada de forma fermentativa, producen la enzima catalasa, no tienen actividad de citocromo C oxidasa y reducen los nitratos a nitritos. De modo típico estos microorganismos producen en agar sangre colonias relativamente grandes, de color gris opaco, secas. La hemólisis en agar sangre es variable y no es característica de ningún género o grupo en particular. La apariencia mucoide de las colonias sugieren la presencia de una cápsula de polisacáridos extracelulares como en el caso de Klebsiella pneumoniae. Las colonias que aparecen como una película delgada o como ondas (swarming) sugieren que el microorganismo es móvil y probablemente sea una especie de Proteus. 

 Las especies de la familia Enterobacteriaceae están ampliamente distribuidas en plantas, suelos, aguas e intestino de animales y humanos y su diferenciación se basa principalmente en la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano. Los sustratos con los cuales pueden reaccionar estas enzimas se incorporan al medio de cultivo junto con indicadores que detectan la utilización del sustrato o la presencia de productos metabólicos específicos, estableciéndose así un perfil bioquímico para hacer la identificación de especie. Estos microorganismos están asociados a diferentes cuadros clínicos en seres humanos, incluyendo la formación de abscesos, neumonías, meningitis, septicemias, infecciones de tracto urinario e intestinal, entre otros. Las bacterias de esta familia forman la mayor parte de la flora normal intestinal y muchas de las especies son importantes en las infecciones nosocomiales.

Morfologia colonial en medios de aislamiento primario 

 A continuación se describe la morfología colonial de algunas especies observada en medios selectivos y diferenciales. 

Agar bismuto-sulfito. 

Este medio es utilizado para el aislamiento de Salmonella typhi mostrando a las 18 horas de incubación colonias negras con brillo metálico a su alrededor y después de 48 horas son completamente negras. Otras especies de Salmonella a las 18 horas se observan de color verde-negruzco y después de 48 horas son uniformemente negras. Las demás enterobacterias son de color verde-café sin brillo metálico. 

Agar Hektoen. 

Se usa en el aislamiento de Shigella spp. y de Salmonella spp., las cuales presentan colonias verdes y colonias azul-verdoso con o sin centro negro, respectivamente. Los demás coliformes presentan colonias rosado-salmón. Algunas especies de Proteus pueden ser semejantes a Salmonella o a Shigella. 

Agar Salmonella-Shigella. 

Se utiliza principalmente para aislar bacterias lactosa-negativa como Salmonella y Shigella, que provienen de aguas, alimentos y muestras clínicas. Salmonella presenta colonias translúcidas con una zona negra en el centro, mientras que Shigella presenta colonias translúcidas. Especies de la familia Enterobacteriaceae lactosapositivas, como Escherichia coli, presentan colonias rosadas. 

Agar Tergitol 7. 

Este medio permite también diferenciar especies fermentadoras de la lactosa de las especies no fermentadoras. Salmonella y Shigella presentan colonias rojas, mientras que Escherichia coli y Klebsiella producen colonias amarillas y verde-amarillo, respectivamente. 

Agar MacConkey. 

Igual al anterior separa las bacterias fermentadoras de la lactosa. Escherichia coli produce colonias rosadas, mientras que Salmonella y Shigella producen colonias translúcidas. 

Agar Eosina-Azul de Metileno (EMB) de Levine. 

Permite la diferenciación de especies fermentadoras de la lactosa. Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli presentan colonias que varían de púrpura a verde metálico. Shigella y Salmonella producen colonias translúcidas.  

Pruebas bioquímicas para identificación de géneros y especies de la familia Enterobacteriaceae 

• Agar TSI. Es un medio de cultivo diferencial basado en la capacidad de los bacilos Gram negativos de fermentar carbohidratos, producir H2S y producir gas. 

• Prueba de orto-nitrofenil-β-galactopiranósido (ONPG). Esta prueba detecta la producción de la enzima β-galactosidasa y permite diferenciar organismos de lenta utilización de la lactosa de aquellos que no la utilizan. La enzima β-galactosidasa es codificada por el gen lacZ del operón lactosa, el cual es inducido en presencia de lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.

 • Prueba de movilidad. Para determinar la movilidad de los bacilos fermentadores. 

• Prueba de gelatinasa. Determina la producción de la enzima gelatinasa, la cual produce la hidrólisis de la gelatina.

 • Prueba de rojo de metilo (RM). Identifica especies de bacterias que producen ácidos fuertes a partir de glucosa.

 • Prueba de Voges-Proskauer (VP). Esta prueba detecta la producción de acetilmetilcarbinol (acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosférico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de α- naftol y creatina. La producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico, donde se producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar una prueba de RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa. 

• Prueba de fenilalanina desaminasa. La determinación de la enzima fenilalanina desaminasa es útil en la diferenciación inicial de especies de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos Gram negativos. 

Producción de descarboxilasas y de dehidrolasas de aminoácidos. Muchas especies de bacterias poseen enzimas capaces de descarboxilar o de hidrolizar aminoácidos específicos, como arginina, lisina y ornitina, en un determinado medio de prueba, con lo cual liberan aminas de reacción alcalina y CO2

• Prueba de ureasa. Los microorganismos que poseen la enzima ureasa hidrolizan urea liberando amoníaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de Christensen permite la detección de menores cantidades de amoníaco por lo que aquellos organismos que producen menores cantidades de ureasa se evalúan con este método, incluyendo Klebsiella, Enterobacter, Brucella y Bordetella bronchiseptica.

 • Producción de indol. El indol es uno de los productos de degradación del metabolismo del aminoácido triptofano. Para su detección la bacteria es cultivada en caldo triptona y posteriormente se utiliza el reactivo de Ehrlich, el cual es más sensible que el reactivo de Kovacs cuando se evalúan bacilos no fermentadores o anaerobios cuya producción de indol es mínima. 

• Utilización de citrato. Esta prueba tiene como objetivo determinar la capacidad de un microorganismo de utilizar citrato de sodio como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento.

• Utilización de malonato. Determina la capacidad de algunas bacterias de utilizar el malonato como fuente de carbono y energía. 

• Prueba de reducción de nitratos. Determina la capacidad de reducir el nitrato a nitrito o gas. Es útil en la identificación de la familia Enterobacteriaceae y en la diferenciación de especies de muchos otros grupos de microorganismos. 

• Prueba de fermentación de carbohidratos. Se recomienda el uso del caldo base púrpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una concentración del 1% para la determinación de la fermentación de carbohidratos y alcoholes para especies de la familia Enterobacteriaceae.

Clasificación por especie de los géneros clínicamente más importantes de la familia Enterobacteriaceae  

 

Salmonella choclorae-suis en agar Mac conkey

Morganella morganii en agar Mac conkey

E. coli en agar Mac conkey, 72 hrs incubación

Enterobacter cloacae en agar Mac conkey, 48 hrs incubación

klebsiella oxytoca en Agar Mac conkey, 48 hrs de incubación

Proteus sp en Agar Mac conkey, 48 hrs de incubación

Bordetella bronchiseptica

 

Dentro del grupo de bacterias conocidos como bacilos no fermentadores o NFBs, que presentan forma bacilar, son Gram negativos y no tienen la capacidad de fermentar la glucosa, sobresale por su importancia la Clase Beta protobacteria del Orden Burkholderiales la Familia Alcaligenaceae con sus géneros Alcaligenes, Achromobacter y Bordetella.

El género Bordetella contiene 8 especies: B. pertussis, B. avium, B. bronchiseptica, B. hinzii, B. holmesii, B. parapertussis. B. petrii y B.trematum.

Las bacterias de este género son bacilos pequeños Gram negativos que miden aproximadamente 0.2 a 0.3 micras de ancho por 0.5 a una micra de largo. Se observan como cocobacilos únicos o en pares y rara vez en cadenas. Estas bacterias crecen en el medio de Bordet-Gengou el cual es una gelosa sangre con papa glicerolada. Las colonias en este medio son lisas, convexas, de apariencia perlada y brillante casi transparentes y rodeadas de una zona de hemólisis no definida.

No licuan la gelatina, La leche tornasolada la viran a la alcalinidad y no requieren factores X ni V. La temperatura óptima de crecimiento es 35-37°C. Presentan antígenos lábiles al calor tanto a nivel de género como de especie. Son parásitos de mamíferos y patógenos a nivel del aparato respiratorio; las cepas de Bordetella pertussis causan la tosferina.

Bordetella pertussis es considerada un patógeno exclusivo de los humanos. La bacteria se disemina mediante los aerosoles o el contacto directo. En los primeros estadios de la enfermedad los síntomas se parecen a los de un resfriado común. En el segundo estadio se desarrolla una tos no productiva y seca. Los episodios de tos pueden llegar a ser paroxismales y van acompañados de un silbido respiratorio al final de ellos. También puede encontrarse exceso de mucosidad, náuseas e inclusive vómito. Este tipo de tos es característico de la enfermedad y puede ser tan severa que cause cianosis y convulsiones.

Bordetella parapertussis es muy semejante a la especie anterior. Sin embargo, es oxidasa negativa y presenta en medios con peptona como la gelosa BHI y en agar Mueller Hinton un pigmento café soluble en agua. También puede crecer en agar MacConkey.

Bordetella bronchiseptica se encuentra frecuentemente como biota normal de las vías respiratorias de conejos, perros y otros animales. Sin embargo, en algunas ocasiones les puede producir una enfermedad respiratoria. Las infecciones humanas por este microorganismo son raras. Crece más rápidamente que las especies anteriores y forma colonias más grandes, las cuales son de color blanco grisáceo y superficie rugosa en el medio de Bordet-Gengou.

Bordetella bronchiseptica es un cocobacilo Gram negativo, aerobio estricto y móvil. Su identificación microbiológica estándar se basa en un perfil característico de pruebas bioquímicas: es oxidasa, catalasa y ureasa positivo, motil (a diferencia de otras especies del género), y bioquímicamente asacarolítico (no fermenta azúcares)

1. Pruebas Enzimáticas y Metabólicas Principales

• Oxidasa: Positiva (\(+\)).

• Catalasa: Positiva (\(+\)).

• Ureasa: Positiva (\(+\)) rápida (generalmente en menos de 4 horas).

• Motilidad: Positiva (\(+\)).

• Reducción de Nitratos: Variable (positiva en la mayoría de las cepas)

2. Pruebas de Utilización de Carbohidratos (No Fermentadora)
A diferencia de otras bacterias, no produce ácidos ni gases a partir de azúcares: 

• Glucosa (Oxidación-Fermentación - OF): Negativa (\(-\)).

• Lactosa, Manosa, Sacarosa, Maltosa: Negativa (\(-\)).

3. Otras Pruebas Bioquímicas Relevantes

• Citrato (Simmons): Positivo (\(+\)).

• Producción de Indol: Negativa (\(-\)).

• Producción de \(H_{2}S\) (Ácido Sulfhídrico): Negativa (\(-\)).

• Descarboxilación de Aminoácidos (Lisina, Ornitina y Arginina): Negativas (\(-\)).

4. Uso de Sistemas Automatizados (API 20E y VITEK 2)
Debido a que el cultivo bacteriológico en medios enriquecidos (como Bordet-Gengou o agar sangre) puede tomar entre 24 y 48 horas, los laboratorios suelen agilizar la identificación utilizando tiras miniaturizadas comerciales o sistemas automatizados.

• En el sistema API 20E, Bordetella bronchiseptica típicamente arroja resultados negativos para la mayoría de las pruebas de azúcares y enzimas del panel, pero destaca fuertemente en la prueba de la ureasa y la oxidasa.

• En equipos como VITEK 2, se utiliza la tarjeta específica para bacilos Gram negativos no fermentadores (GN), donde su perfil asacarolítico y positivo a la ureasa y oxidasa permite identificar la bacteria de manera inequívoca.

Debido a la naturaleza inerte de la bacteria en pruebas de fermentación de azúcares, se diferencia rápidamente de otras bacterias Gram negativas similares (como el género Alcaligenes) o de otras Bordetellas (como Bordetella pertussis, que es ureasa negativa y no móvil). 

Bordetella bronchiseptica en agar Sangre, 48 hrs

Bordetella bronchiseptica en agar Mc Conkey, 48 hrs

Bordetella bronchiseptica en agar Müeller Hinton, 48 hrs