Frotis vaginal-Reporte

 INTRODUCCIÓN

Las ratas albinas hembras ( Rattus norvegicus ) tienen una clasificación reproductora como hembra poliéstrica continua. El ciclo estral es el tiempo que ocurre entre dos periodos estrales, también llamado celo o calor, que está regulado por la interacción de varios órganos: entre ellos están el eje hipotálamohipófisis, el ovario y el útero; en ratas varía normalmente entre 4 a 5 días, en los que se dan las fases: folicular o de regresión del cuerpo lúteo (proestro), fase periovulatoria (estro, metaestro) y fase lútea (diestro).

El ciclo estral es un proceso dinámico, continuo y dependiente de la interacción de órganos como el cerebro y el tracto reproductivo de la vaca, varias hormonas y efectos medioambientales; el crecimiento y desarrollo de los folículos y del cuerpo lúteo está regulado por la interacción coordinada de todos estos elementos y hormonas.

En la mujer los cambios cíclicos son poco notables en el epitelio vaginal, en cambio en la rata hay cambios prominentes en la morfología de dicho epitelio.

Una de las diferencias principales consiste en que en el ciclo menstrual los cambios uterinos son más notorios, el endometrio uterino depende en mayor grado en las hormonas ováricas y la necrosis que sufre cuando los niveles de estas hormonas bajan al final de la fase postovulatoria produce la degeneración del epitelio uterino acompañada de hemorragia (menstruación). Dicha menstruación está ausente en las hembras de mamíferos no primates donde los cambios en el endometrio uterino son menos notorios, dado que la fase lútea del ciclo está atenuada, sin embargo hay grandes cambios morfológicos en el epitelio vaginal que pueden usarse para caracterizar el ciclo estral, por medio del frotis vaginal que es un método de exploración microscópica de secreción vaginal, que consiste en realizar una extensión de la muestra sobre un portaobjetos para examinar al microscopi o .

Por lo expuesto anteriormente, en esta sesión de laboratorio se puso en práctica la elaboración de frotis vaginales y su observación en el microscopio óptico para identificar los cambios del epitelio vaginal de rata y asociarlo con la fase del ciclo estral correspondiente, siendo que estos conocimientos serán de utilidad para la experimentación con anticonceptivos.

OBJETIVOS

Aprender a realizar los frotis vaginales y adquirir las habilidades necesarias para la identificación de las diferentes etapas del ciclo estral de la rata de acuerdo a las células observadas en cada una de ellas mediante la observación microscópica y relacionándolo con los cambios hormonales.

HIPÓTESIS

Sí son manejadas ratas Wistar hembras sin algún tratamiento y a estas se les monitorea mediante la técnica de frotis vaginal, entonces podrá ser posible el apreciar las diferentes etapas del ciclo estral de las mismas pudiendo así reconocer el ciclo de manera secuencial.

DIAGRAMA ECOLOGICO

RESULTADOS

ANÁLISIS DE RESULTADOS

El frotis vaginal es una prueba muy sencilla, totalmente indolora y rápida. Este consiste en la recolección de una muestra con fines analiticos para la evaluación microscópica de la secreción vaginal. (K alant Harold, 2002) Como se mencionó con anterioridad el ciclo estral se define como el período comprendido entre la aparición del estro y hasta el comienzo del siguiente, o bien, el intervalo de tiempo comprendido entre dos ovulaciones. (K atzung, B, 2002 ). Es necesario mencionar que la duración del ciclo estral depende de cada especie.

Para estudiar este ciclo se utiliza frecuentemente a las ratas de laboratorio ya que la duración del mismo es muy corto (4 – 6 días) y se pueden apreciar las etapas comprendidas en el mismo de manera sencilla.

La técnica experimental consiste en la introducción vaginal de un dispositivo con punta redondeada con solución salina, posteriormente se realiza la preparación empleando como agente fijador una solución de alcohol éter (1:1) y como agente de tinción el colorante violeta de genciana posteriormente se observa dicho frotis al microscopio para identificar por citología la etapa del ciclo estral en la cual se encuentra. Las distintas fases del ciclo estral se pueden diferenciar de acuerdo con la presencia de estructuras celulares específicas de cada etapa. En primer lugar, la etapa denominada proestro sucede días antes de la ovulación, puede durar entre 12 y 18 horas. En esta predominan las células epiteliales nucleadas de gran tamaño y cabe mencionar que no hay presencia de leucocitos, de manera adicional es sabido que en dicha fase el pH vaginal es de 5.4 y la vagina se torna seca siendo que los ovarios están en plena producción folicular.

Dentro de esta fase se pueden distinguir varias subfases según el número de células y tamaño de los núcleos. En proestro tardío las células epiteliales superficiales empiezan a transformarse en células cornificadas, con aspecto escamoso y anucleado, transparente de forma irregular, que aparecen en el frotis claramente distinguibles de las células nucleadas del epitelio vaginal.

Ahora bien, en la etapa conocida como estro, la cual dura entre 9 y 15 horas, presenta un pH vaginal de 4.2 y es en esta fase que aparece un flujo vaginal abundante y frecuente. Los estrógenos circulantes provocan cambios en el útero y aparece el deseo de apareamiento, de igual forma aumenta la producción de hormona folículo estimulante (FSH) y hormona luteinizante (LH) en los dos días siguientes. El estro se caracteriza por cambios conductuales en el animal siendo que las ratas muestran una mayor actividad, tienden a frotar más la cabeza y espalda mostrando a su vez conductas de nerviosismo. 

Específicamente en la recta final del mismo, ocurre la ovulación que suele durar unas 12 horas, es preciso mencionar que en esta fase existe una gran abundancia de células anucleadas escamosas que proceden de la descamación del epitelio superficial de la vagina las cuales pueden aparecer formando masas blancas e irregulares. La fase ovulatoria y la conducta sexual de la rata tienden a estar sincronizadas por ritmos biológicos circadianos de manera que estos eventos ocurren en determinadas horas (medianoche y primeras horas de la mañana, respectivamente).

De manera subsecuente, el periodo de metaestro se caracteriza por la presencia de algunos leucocitos además de células cornificadas anucleadas, en el caso de los leucocitos, estos se reconocen bien por su tamaño pequeño y la forma irregular de su núcleo, que aparece fuertemente teñido. Es importante mencionar que esta es una fase de transición, que dura de 10 a 4 horas la cual se presenta una vez finalizada la fase del estro que permite la continuación del ciclo hacia la siguiente fase denominada diestro.

Finalmente, en el diestro, los leucocitos invaden el epitelio vaginal y son las células predominantes en los frotis vaginales. Esta es la fase más larga y variable del ciclo en la cual empiezan a aparecer células nucleadas epiteliales, cuya abundancia aumenta a medida que avanza el diestro. Al final de esta etapa, los folículos ováricos empiezan a crecer bajo la influencia de pequeñas cantidades de FSH y LH en preparación para el próximo ciclo.

Ahora bien, como puede ser observado en la tabla 2: “Observaciones del frotis vaginal para las diferentes ratas”, de la sección de resultados las etapas del ciclo estral analizadas en las diferentes ratas, no corresponden de manera total a la secuencia indicada en la literatura para el transcurso normal del ciclo. Sin embargo se sabe que el ciclo estral, puede ser interrumpido por factores externos siendo uno de estos el estrés. El estrés, es un proceso químico, físico y emocional, causante de una tensión que puede llevar a la enfermedad física de las ratas, produciendo la suspensión del ciclo estral. (Cabrera, 2004) De igual manera, la literatura reporta que los cambios de humedad, la intensidad lumínica o el estrés, patrones característicos de las ratas trabajadas debido a su constante movilización por los procedimientos experimentales, a través de las glándulas pineal y adrenales pueden disociar la apertura vaginal, la primera ovulación y de igual forma el ciclo estral, fenómenos que se encuentran correlacionados habitualmente. Esto podría deberse a bajos niveles de estradiol insuficientes para estimular la LH y FSH necesarias para la ovulación. (Galassi,s/a)

De manera adicional, la fisiología ovárica y uterina puede ser influenciada por factores hormonales externos, no dependientes del ciclo hormonal endógeno, tales como: disruptores endocrinos (contaminantes ambientales, tóxicos o drogas), hormonas exógenas, intervenciones quirúrgicas de órganos reproductivos o la estimulación mecánica del cuello cervical. Según sean los casos y los efectos, se puede alterar el ciclo estral, presentándose variaciones en las proporciones relativas de las células del frotis vaginal, lo cual será indicador directo de alteraciones del ciclo ovárico y uterino. En el caso de los cambios fisiológicos hormonales en el ciclo reproductivo de mamíferos, a causa de la estimulación mecánica del cuello cérvicouterino por manipulación del animal o por apareamiento de la

hembra con un macho estéril, estos son provocados por la inducción de cambios hormonales característicos del estado de “pseudopreñez”, similar al estado hormonal inicial de una verdadera gestación en la rata. Ambos estados se caracterizan por el mantenimiento del cuerpo lúteo que permite el mantenimiento de la secreción de progesterona durante los 12 días de pseudopreñez. En el caso de una verdadera gestación el cuerpo lúteo es mantenido por las gonadotropinas de la placenta para la continua secreción de progesterona por lo cual, en los dos casos antes mencionados, en el frotis vaginal se encontrará un estado de “metaestrodiestro”, característico de este estado fisiológico. (Ferré, 2010)

CONCLUSIONES

Mediante la realización de esta práctica aprendimos a realizar los frotis vaginales y adquirimos la capacidad y habilidad necesarias para la identificación de las diferentes etapas del ciclo estral de la rata de acuerdo a las células que observamos en cada una de ellas mediante su observación microscópica, lo cual nos permitió seguir la secuencia de las diferentes etapas del ciclo estral, sin embargo en nuestros resultados algunas de estas fases no concordaban, atribuimos esto a factores externos como el estrés, condiciones ambientales y/o el metabolismo propio de las ratas.

REFERENCIAS

I. Cabrera, P. [et.al.] (2004) Estrés: Factor modificante del ciclo estral de la rata. [en línea] ACMOR: México. Disponible en: http://acmor.org.mx/sites/default/files/Proyecto_Estres.pdf

II. Ferré, L. (2010) Sistema reproductor: Cambios en la fisiología ováricauterina por estímulos hormonales. [En línea] Universidad de Buenos Aires: Argentina. Disponible en:

http://www.dbbe.fcen.uba.ar/old/materias/fac/TPSistemaReproductor2010.pdf

III. Galassi, P. (s/a) Reproducción de especies en laboratorio: Rataratón. [en línea]

Universidad de Buenos Aires: Argentina. Disponible en: http://dpd.fvet.uba.ar/cartelera/00010199.pdf

IV. Kalant Harold, (2002). Principios de Farmacología médica. 6ªed. Ed. Oxford University Press, México.

V. Katzung, B (2002), Farmacología Básica y Clínica. 8 ° edición. Editorial Manual Moderno